thay đổi chiều cao peak trong HPLC

[susu]

Chào mọi người.
Mình đo mẫu bằng HPLC, nhưng peak xuất hiện thay đổi độ cao liên tục trong các lần đo (0.02, 0.04,0.05,0.06) trong khi các peak khác thì không thay đổi độ cao tương ứng giữa các lần đo trong cùng một mẫu.Đó có thể do những nguyên nhân nào, và cách khắc phục là gì, nhờ mọi người giúp đỡ, cám ơn nhiều....

[tranduyphong]

bạn phải nói rõ là bạn đang chạy cho chất nào,thuộc họ nào, peak thay đổi là peak của tạp chất hay của chất cần phân tích, pha động bạn sử dụng là gì... bạn hỏi chung chung quá trả lời không được đâu.Nếu dựa vào câu hỏi của bạn thì tôi nghĩ bạn có thể đã pha mẫu chưa chính xác trong quá trình cân và định mức,hoặc cột của thiết bị quá bẩn thôi. chào bạn

[susu]

mình cũng nghĩ là do cột bẩn vì khi mình chạy áp lên đến 1200, nên mình đã thay guardcolumn, sau đó áp giảm xuống 900, đường nền cũng ổn định trở lại. à mình quên nói là peak thay đổi đó là peak mẫu cần xác định hàm lượng, dung môi ACN:H2O5.chỉ có mình nó thay đổi thôi, còn 2 peak còn lại không thay đổi, nếu cân pha không chính xác thì tất cả phải đều thay đổi chứ, đúng không? vậy bạn có ý kiến gì khác giúp mình với...( cho mình hỏi thêm:rửa cột có phải là chạy 100% ACN với tốc độ dòng lớn không, nếu không thì phải rửa như thế nào cho đúng). Cám ơn nhé bạn....

[baonguyen88]

Chào bạn,
Sau khi bạn thay guardcolumn, đường nền ổn hơn, áp suất giảm thì đúng là do guardcolumn bạn bị dơ. Nhưng sau khi thay, độ cao peak có còn thay đổi hay không? Còn về diện tích peak và hình dạng peak thì sao?
Nếu diện tích và hình dạng peak vẫn không ổn định, bạn nên:
- Rửa lại cột hoặc phục hồi cột.
- Sau khi rửa rửa xong, bạn chạy lại. Nếu vẫn chưa ổn thì bạn có thể thử thay đổi tỷ lệ pha động xem sao.

Vài ý kiến trao đổi cùng bạn.

[susu]

chỉ có chiều cao peak thay đổi thôi bạn ah, còn hình dạng thì vẫn rất đẹp. Giống như là độ lặp lại không tốt vậy. Mình nhắc lại là chỉ có 1 peak bị như thế thôi, còn 2 peak kia thì rất ổn định! vậy bạn có suy nghĩ gì không...

[quachtk]

Chào bạn!
Theo mình bạn nên rửa cột lại. Mình nghĩ có lẽ cột không sạch. Còn về trình tự rửa cột thì tùy theo trước đó cột bạn chạy hoạt chất có tính chất như thế nào.

[o0HPLC0obakuraryo]

mình thấy các bạn muốn học hỏi về cách khắc phục những lỗi thường gặp ở peak sắc ký đồ và cách bảo quản cột nhưng những câu hỏi thì quá là mơ hồ:
mỗi loại cột sẽ có cách rửa cột riêng và bảo quản cột riêng. còn ngoài ra tùy vào chạy hoạt chất nào thì chúng ta sẽ có phương pháp rửa cột riêng trước khi chuyển qua rửa cột để bảo quản. Thông thường pha động rửa cột và bảo quản cột tỉ lệ ACN:H2O la 70/30
để trả lời câu hỏi của ban về chiều cao của peak thay đổi thì mình cần biết bạn chạy hoạt chất gì và pha động như thế nào. nhưng nếu các peak khác ổn định thì khả năng tại cột dơ sẽ k phải là vấn đề quan trọng nhất đâu