Xin mọi người giúp mình chỗ này nhé! Mình muốn định lượng một thành phần trong mẫu.Mẫu gồm 3 chất. Mình muốn hỏi khi chạy HPLC thì chúng ta nên chọn bước sóng mà tại đó chất cần định lượng hấp thụ cực đại ( 285nm) hay chọn bước sóng mà tại đó 2 chất còn lại hấp thụ không đáng kể? Thêm một vấn đề nữa: nếu chạy HPLC để kiểm tra độ tinh khiết của mẫu thì ở mỗi bước sóng khác nhau sẽ cho sắc ký đồ khác nhau ( số peak xuất hiện ít hay nhiều ). Vậy làm sao để đánh giá thành phần % các thành phần cho đúng?xin các bạn chỉ giáo. Cám ơn nhiều...
petiti
07-06-2010, 09:29 PM
Hai câu hỏi của bạn rất hay. Mình xin góp tí ý kiến như sau:
1. Nếu 3 chất của bạn tách hẳn ra khỏi nhau (tức là có độ chọn lọc tốt) thì nên chọn bước sóng tại đỉnh hấp thụ cựu đại vì sẽ tăng được độ nhạy lên đáng kể. Trong trường hợp khác nếu độ chọn lọc không tốt, các píc còn phủ lên nhau phần nào đó thì chọn tại bước sóng 2 chất còn lại kém hấp thụ nhất thì tốt hơn. Tốt nhất là cần khảo sát điều kiện sắc ký để thu được độ phân giải píc tối ưu.. như vậy có thể giải quyết được độ chọn lọc và độ nhạy.
2. Gọi là để kiểm tra độ tinh khiết thì cần phải đúng mục đích là chỉ để kiểm tra độ tinh khiết thôi. Tức là có một thành phần có hàm lượng rất cao còn các thành phần khác có hàm lượng thấp. Người ta có thể dựa vào phương pháp phần trăm diện tích để tính % các chất, tuy nhiên trong một số trường hợp phương pháp này thường mắc sai số tương đối lớn vì khả năng hấp thụ của chất phân tích và các tạp chất tại bước sóng phân tích là không giống nhau. Cho nên người ta chọn các bước sóng có khả năng hấp thụ được nhiều chất nhất để thực hiện phép định lượng này (thường là bước sóng thấp).
Thân,