Cô lập hợp chất thiên nhiên bằng phương pháp sắc kí cột

[tigerchem]

Hiện nay bạn em đang làm đề tài về hợp chất thiên nhiên và gặp khó khăn sau:

Bộ phận của cây nghiên cứu là rễ cây (loại rễ cọc) (có hoạt tính chống viêm theo kinh nghiệm dân gian).

Sau khi ly trích với Methanol trong 3 h (trích nóng) thu cao thô.
Chiết cao thô với ethyl acetate và dùng cao này để chạy với các phân đoạn.

Ở phân đoạn MeOH:CHCl3 (8:2) có 1 vệt dài trong đó có 2 chấm tròn nhưng em đã dùng nhiều hệ dung môi (với các dung môi thông dụng như MeOH, CHCl3, CH3CN, H2O) nhưng vẫn không tách ra được 2 (các) chất này.

Mong các anh chị có kinh nghiệm về hợp chất thiên nhiên giúp đỡ.
Em xin cảm ơn.

PS: Em cũng đang gặp khó khăn về việc định danh cây đang làm vì gửi mẫu ở 3 nơi trả về 3 kết quả khác nhau (nhưng cùng họ ô rô).

[hovietduc]

mình cũng vừa làm luận văn tốt nghiệp về hợp chất tự nhiên (ancaloit trong cây dừa cạn hoa trắng ở quảng nam), theo kinh nghiệm của tôi thì trong trường hợp này bạn nên dùng mọt hệ nhiều hơn hai dung môi. mà bạn cũng nên nói rõ bạn định táhc loại hợp châá nào trong đó chứ?

[tigerchem]

Hiện nay bạn em đã chạy được 2 bản có 1 vết tròn (bản mỏng silicagel pha thường)nhưng khi chạy pha đảo thì 1 bản có 2 vết còn 1 bản có 4 vết. Hiện đang cố gắng xử lý, nếu được anh có thể pm cho em email hoặc số điện thoại để em liên lạc cụ thể.
Xin cảm ơn anh.

[hongocquoc]

Bạn Hovietduc ơi ! bạn ở QN à?
Bạn vừa mới làm đề tài về cây dừa cạn.
Vậy bạn có thể post lên diễn đàn cho vài bài báo mà bạn đã nghiên cứu hoặc pp bạn mới vừa làm. Nếu bạn giấu nghề ko post đề tài của bạn thì có thể post cho vài tài liệu mà bạn tâm huyết về pp chiết tách, phân lập alkaloid từ cây dừa cạn (catharanthus roseus).
Xin cảm ơn nhiều..............

[bich thuy]

mình cũng vừa làm luận văn tốt nghiệp về hợp chất tự nhiên (ancaloit trong cây dừa cạn hoa trắng ở quảng nam), theo kinh nghiệm của tôi thì trong trường hợp này bạn nên dùng mọt hệ nhiều hơn hai dung môi. mà bạn cũng nên nói rõ bạn định táhc loại hợp châá nào trong đó chứ?

Có thể dùng những dung môi nào vậy anh? Chỉ cho tụi em biết được ko?
anh có thể đưa một số bài lên diễn đàn này được ko?
cảm ơn anh nhiều....
:welcome (
có phải anh ở QNam ?
Em là dân xứ Quảng đây???????
:24h_057:

[golddawn]

Golddawn đọc thấy bài này thì muốn góp ý kiến như sau. Bên hữu cơ có rất cán bộ trẻ, đặc biệt là trong nhóm của hai cô Liên Hoa và cô Phi Phụng. Nếu như các bạn là sinh viên của khoa thì trước tiên các bạn nên hỏi trực tiếp các cán bộ giảng dạy và nghiên cứu trẻ. Thứ hai là các bạn dùng các tài liệu tham khảo của các sinh viên khóa trước.
Nói về chạy cột sắc ký, golddawn mù tịt. Tuy nhiên, nguyên tắc của nó có thể tham khảo trong các tài liệu cơ bản về sắc ký. Kỹ thuật nhồi cột cũng khá quan trọng, chuẩn bị mẫu để cho vào cột... là các thứ các bạn phải làm hoàn hảo trước đã. sau đó, dựa trên sự tương đồng về khung cấu trúc của các chất các bạn cần quan tâm để lựa ra một chế độ dung môi thích hợp (ở đây là tính phân cực của dung môi). KHi phần sắc ký thô xảy ra xong rồi thì các bạn điều chỉnh độ phân cực của dung môi rửa giải để tách tốt hơn.
Một vài ý kiến sơ đẳng, nằm ngoài chuyên ngành của golddawn, đơn thuần và sự gợi ý.
P/S: Dân xứ Quảng Nam nổi tiếng là cần cù, chịu khó. Chúc các bạn hoàn thành tốt đề tài của mình.

[Shadow]

Đọc được bài này hơi trễ nên không biết có giúp gì cho bạn được không :( Theo dõi mấy bài của bạn viết chắc bạn cũng đã đọc nhiều sách về cô lập hợp chất thiên nhiên rồi.Vậy thì xem như bạn đã biết những cái cơ bản ( trong sách viết vậy thôi nhưng thực tế khác xa lắm ). Về vấn đề bạn hỏi các xử lý thì thật sự không thấy được sắc ký lớp mỏng của bạn nên không thể giúp gì được, nếu được bạn hãy post kết quả sắc ký lớp mỏng lên mới nói tiếp được. Một vấn đề khác là dung môi bạn sử dụng giải ly hơi lạ, KHÔNG KHI NÀO sử dụng silica gel pha thường mà sử dụng hệ MeOH : CHCl3 ( 8 : 2 ) chắc bạn viết nhầm, vì tỷ lệ dung môi MeOH khoảng 30% đã có thể hòa tan silicagel pha thuận. Và cũng chưa thấy ai dùng ACN chạy cho pha thường hết.

Đối với pha thường các hệ dung môi thường sử dụng : MeOH, Acetat etil , aceton, CHCl3 , hexan ( eter dầu ), CH3COOH ( rất ít )

Pha đảo : Nước , MeOH, ACN

[tigerchem]

Cám ơn bạn rất nhiều, ở trên mình viết nhầm, phải là CHCl3: MeOH 8:2, còn acetonitril mình dùng chạy pha đảo. Hiện nay thì bạn mình đã đi đến giai đoạn cạo bản, vì lượng chất còn quá ít nhưng vẫn bị hiện tượng là khi cạo chỉ có 1 vết nhưng sau khi giải hấp thì lại lên 2 vết, cạo lại 1 lần nữa thì 1 vết nhưng chạy pha đảo lên 4,5 vết. Bị nhiều lần vậy rồi nên bạn mình cũng thất vọng nhiều lắm nhưng thời gian còn ít nên phải chạy nước rút và cố gắng hết mình thôi, mình có đề nghị post hình TLC lên để mọi người cùng trao đổi nhưng vì nhiều lý do tế nhị nên không thực hiện được, mong các bạn thông cảm. Dù sao đi nữa cũng chân thành cám ơn các bạn rất nhiều, mong rằng đề tài này sẽ là nơi trao đổi tiếp những vấn đề về cô lập hợp chất thiên nhiên bằng sắc kí cột.
Một lần nữa xin chân thành cám ơn các bạn.

[Shadow]

Không có gì đâu, là chuyên môn nên biết chút thôi. Hiện nay ngoài cách cô lập bằng sắc ký cột, nếu hợp chất quá khó tách có thể sử dụng HPLC điều chế, phương pháp này rất hay và hiệu quả chỉ có điều do sử dụng HPLC nên giá thành khá đắt ( khoảng 1M cho mỗi mẫu, hiệu suất thu hồi khoang 70% ). Seminar chuyên ngành kỳ này có một bạn làm về HPLC điều chế ( preparative HPLC ) bạn nào muốn nghe cho biết thì 15/7 có thể đến bộ môn hóa hữu cơ để nghe chơi ( nghe thui, thắc mắc gì thì hỏi nguời hướng dẫn bạn đó nha :b )

[bich thuy]

Không có gì đâu, là chuyên môn nên biết chút thôi. Hiện nay ngoài cách cô lập bằng sắc ký cột, nếu hợp chất quá khó tách có thể sử dụng HPLC điều chế, phương pháp này rất hay và hiệu quả chỉ có điều do sử dụng HPLC nên giá thành khá đắt ( khoảng 1M cho mỗi mẫu, hiệu suất thu hồi khoang 70% ). Seminar chuyên ngành kỳ này có một bạn làm về HPLC điều chế ( preparative HPLC ) bạn nào muốn nghe cho biết thì 15/7 có thể đến bộ môn hóa hữu cơ để nghe chơi ( nghe thui, thắc mắc gì thì hỏi nguời hướng dẫn bạn đó nha :b )

mình có 1 hh các alkaloid được tách ra từ cây dừa cạn. Mình muốn tách từng alkaloid ra thì dùng pp nào anh SHADOW ơi ! Nếu dùng HPLC ở VN mình thì có thể cô lập được ko ? Giá cả bạn nói là 1 triệu hay 10 triệu vậy?

[Shadow]

Alkaloid có hoạt tính chống ung thư từ cây dừa cạn đã được nghiên cứu rất nhiều , bạn thử tìm trong thư viện khoa Hóa tài liệu về cây dừa cạn thử xem người ta làm thế nào. Tui có biết một người là cô Đoàn Thị Hồng Nhung của bộ môn Hóa hữu cơ hiện cô đang công tác ở Pháp, đề tài thạc sỹ của cô là làm về cây dừa cạn. Sinh viên khóa 03HC cũng có một nhóm đã làm nhưng không thành công vì alkaloid đó hàm lượng rất thấp,rất khó cô lập. Chỉ biết đến vậy thôi vì chưa có thời gian nghiên cứu sâu hơn nên cũng không biết là alkaloid gì :24h_093:
Về cách cô lập thì alkaloid do tính base của nó nên ngoài cách cô lập như các chất thông thường nó còn có quy trình cô lập riêng ( quy trình này sẽ giúp tách được các alkaloid ra khỏi các phần khác ). HPLC điều chế hiện có sử dụng đầu dò UV, nên nếu chất bạn hấp thu UV thì có khả năng có thể tách được, giá tiền là khoảng 1 triệu tùy theo mẫu ( mẫu đưa vào điều chế bằng HPLC phải tương đối sạch chứ không phải như dạng cao ban đầu ). Máy này hiện có ở phòng phân tích trung tâm ĐH KHTN, bạn có thể liên hệ với phòng để biết thêm chi tiết :hun (

[bich thuy]

Alkaloid có hoạt tính chống ung thư từ cây dừa cạn đã được nghiên cứu rất nhiều , bạn thử tìm trong thư viện khoa Hóa tài liệu về cây dừa cạn thử xem người ta làm thế nào. Tui có biết một người là cô Đoàn Thị Hồng Nhung của bộ môn Hóa hữu cơ hiện cô đang công tác ở Pháp, đề tài thạc sỹ của cô là làm về cây dừa cạn. Sinh viên khóa 03HC cũng có một nhóm đã làm nhưng không thành công vì alkaloid đó hàm lượng rất thấp,rất khó cô lập. Chỉ biết đến vậy thôi vì chưa có thời gian nghiên cứu sâu hơn nên cũng không biết là alkaloid gì :24h_093:
Về cách cô lập thì alkaloid do tính base của nó nên ngoài cách cô lập như các chất thông thường nó còn có quy trình cô lập riêng ( quy trình này sẽ giúp tách được các alkaloid ra khỏi các phần khác ). HPLC điều chế hiện có sử dụng đầu dò UV, nên nếu chất bạn hấp thu UV thì có khả năng có thể tách được, giá tiền là khoảng 1 triệu tùy theo mẫu ( mẫu đưa vào điều chế bằng HPLC phải tương đối sạch chứ không phải như dạng cao ban đầu ). Máy này hiện có ở phòng phân tích trung tâm ĐH KHTN, bạn có thể liên hệ với phòng để biết thêm chi tiết :hun (

Mình tò mò quá. Nếu cô lập ko thành công thì thế nào? Vì đề tài tốt nghiệp ThS mà ??? Mẫu phải tương đối sạch à? Bạn có thể cho địa chỉ của TT này ko?

[Shadow]

Phòng phân tích trung tâm nằm tại trường đại học Khoa học tự nhiên đó, nó nằm ở B16 hay gì đó :) Nếu không cô lập thành công thì làm cái khác chư bít sao giờ. Mà trước khi làm phải tìm tài liệu cẩn thận đã . Mấy hôm nay bận quá không tìm giúp bạn được, vô mấy thư viện tìm thử nghe !

[lê thị dung]

Xin chào các bạn.Mình là thành viên mới của diễn đàn. Đọc các bài viết của các bạn, mình cũng muốn góp một câu trả lời và một câu hỏi.
-Khi các bạn thử trên bản mỏng mà thấy có 2 (thường chỉ 2 mới có thể được) vệt tròn, tốt nhất là các bạn không nên cố tách nữa, mà cố gắng làm sạch để trên bản mỏng chỏ còn lại 2 vết tròn như thế là quá thành công rồi, vì chất của bạn có thể là hỗn hợp 2 chất nhưng xác xuất cao nhất là hỗn hợp 2 chất đồng phân của nhau. Hiện nay, đây là một hướng nghiên cứu rất ưa thích tại viện hoá học bở vì các chất mà chúng ta có thể tách được thì có 99% là chất cũ (đã biết) do đó hỗ hợp thì quá tuyệt vời (nhưng với điều kiện là người giải phổ cho các bạn phải là người giỏi, đặc biệt là có kinh nghiệm thâm niên, chứ nếu ko sẽ làm sailệch kq.
- Hiện nay mình cũng đang rất quan tâm đến ankanoit,nhưng kỉ thuật về cột sắc kí pha đảo và các pp tách chiết ankanoit mình hoàn tàon mù tịt. Rất mong nhận được sự giúp đỡ của các bạn, đặc biệt là bạn hovietdưc. Xin cảm ơn

[merino]

Không có gì đâu, là chuyên môn nên biết chút thôi. Hiện nay ngoài cách cô lập bằng sắc ký cột, nếu hợp chất quá khó tách có thể sử dụng HPLC điều chế, phương pháp này rất hay và hiệu quả chỉ có điều do sử dụng HPLC nên giá thành khá đắt ( khoảng 1M cho mỗi mẫu, hiệu suất thu hồi khoang 70% ). Seminar chuyên ngành kỳ này có một bạn làm về HPLC điều chế ( preparative HPLC ) bạn nào muốn nghe cho biết thì 15/7 có thể đến bộ môn hóa hữu cơ để nghe chơi ( nghe thui, thắc mắc gì thì hỏi nguời hướng dẫn bạn đó nha :b )

Em thấy anh Shadow nói đến vấn đề sử dụng HPLC điều chế. Xin hỏi anh địa chỉ cụ thể của nơi chạy HPLC điều chế mà anh bảo để em gửi mẫu đi tách. Hiện nay em cũng đang gặp khó khăn trong đề tài của em. Cảm ơn anh!

[ancistrocladus]

Theo mình thì nên cố gắng tách bằng các phương pháp có sẵn trong Lab của các bạn trước khi đem đi thuê chạy trên pHPLC. Thứ nhất là vì thiết bị này chưa thịnh hành ở VN và thứ hai là tốn kém. Một số điểm bạn cần cố gắng làm trước khi bó tay ngồi chờ cứu viện của các thiết bị mà bạn không có sẵn, theo tôi như sau:
-Cố gắng tách các vết ra khỏi nhau trên bản mỏng phân tích, anlytical TLC-0.25 mm , với sự khác nhau của ∆Rf ít nhất là 0.015. Khảo sát với thật nhiều hệ dung môi khác nhau vì có thể hệ này không tách nhưng sang hệ khác nó lại tách, vì để tạo ra một resolution đủ lớn thì các bạn biết rồi là nó phụ thuộc vào tính phân cực (polarity) và tính lựa chọn (selectivity factor) của hệ dung môi (còn yếu tố khác như pha tĩnh là silica gel thì đã bị cố định bởi nhà sản xuất mất rùi). Các giá trị Rf nên nằm từ 0.25 -0.55 vì trong khoảng này có sự ổn định khi chuyển sang tách trên cột silica gel (40-63 µm) với cùng 1 loại dung môi. Nếu chạy sắc ký cột nhanh FCC thì cần ∆Rf ít nhất là 0.1 thì tách mới dẽ không thì sẽ cần chạy trên cột có chiều cao và chạy chậm để tách các ∆Rf khoảng 0.03. Với các alkaloid thì người ta dùng thuốc thử Dragendoff và hay dùng hệ dung môi TCM/MeOH hoặc TCM/M/nước đôi khi cần thêm các bazo vào như là TCM bão hòa NH3 hoặc bazo hưu cơ. Để thay TCM người ta hay dùng DCM cho đỡ đôc. Như tách hiệu quả thì TCM vẫn hữu dụng hơn dù là trên TLC khoẳng cách Rf gần giống nhau, điều này là do hệ dm có TCM với hệ có DCM thể hiện tính lựa chọn khác nhau. Tính lựa chọn thể hiện rõ nhất khi tách các terpenoids đang dùng hệ dung môi H/EtOAc mà chuyển sang chạy DCM/ AC hoặc TCM/MeOH có độ phân cực tương đương (khoảng cách Rf như nhau), ở 1số ít trường hợp vết thấp chuyển vị trí cho vết cao và ngược lại, cứ như trên RP-TLC vậy.<o:p></o:p>
Với các hỗn hợp phân cực như peptides, saponins, glycosides hoặc flavonoid glycoside thì khó tách hơn, người ta vẫn thích dùng TCM/MeOH/nước như 70/30/3; 30/9/1; 65/25/4; 65/35/10; BuOH/AcOH/H2O = 5/1/4; EtOAc/MeOH/H2O = 8/1/1 hoặc EtOAc/MeOH/H2O/toluene = 100/15/14/2 và rất nhiều hệ khác hiệu quả tách cao. Chúng ta chỉ cần khảo sát kỹ thì chọn được hệ dung môi thích hợp dễ tách, dễ cô cất dung môi, rẻ tiền và không độc hại.<o:p></o:p>
Với các hỗn hợp nhỏ hơn 50 mg thì chay cột nhỏ từ các pipet nhỏ hoặc ai biết đổ pTLC thì càng nhanh, đưa chất lên bản mỏng và triển khai sau đó cạo ra và rửa giải trong 1 pipet nhỏ là đủ. Chỉ cần độ tinh khiết 94-95% là chạy NMR ngon lành rùi. Đôi khi hỗn hợp đồng phân 85-90 % cũng phải chịu thôi.<o:p></o:p>
Cuối cùng nễu qua rất nhiều hệ dm mà vẫn không tách được trên TLC thì thôi đành test thử với RP-TLC vậy thôi. Tiếp theo là tách thử trên RP-SPE như Sep-Pak C18 trước khi dựng cột C18 lên. Nếu mà vẫn không tách được trên open ODS (Đôi khi SEPABEADS hạt nhỏ hoặc Diaion HP-20 chạy với dm MeOH/H2O hoặc Sephadex LH20 với hệ dm H/DCM/MeOH = 5/5/2; DCM/MeOH =5/5 hoặc MeOH lại có thể giải quyết được) thì đành mang ra cầu kiu pHPCL.

[bitmus]

Mình đang làm bảo vệ tốt nghiệp về nghiên cứu thành phần hóa học cây rau sam (portulaca oleracea l.)mình đã tìm ở các thư viện Quốc gia , thư viện kỹ thuật ( 24 lý thường kiệt HN) và thư viện DH Dươc HN .. nhưng chưa tìm được đề tài nào về cây này, có bạn nào biết có ai đã từng làm về cây này hay báo cáo nào về cây này có thể giúp mình không ? mình rất cảm ơn các bạn

[phucnguyen860821]

may anh chi ơi giúp em vói em đang tim hiểu về cay lục bình ( bèo tay) anh chị nào biết trong cay lục binh thì tôn tại những chất thien nhiên gì giúp em nha .......

[tb_0000]

Trên mạng và trong báo mình cũng thấy nhiều bài về cây rau sam. thường là về phần chữa bệnh. còn về khóa luận tốt nghiệp hay đề tài ở trường bạn thì mình không biết. Nếu bạn muốn tìm hiểu về cái khác ngoài việc để viết đề tài thì bạn có thể tìm trên các báo: Sức khỏe đời sống, Tạp chí dược học hoặc một số sách về dược liệu hoặc dược cổ truyền là có đó. Nhưng tài liệu khá cũ vì bây giờ cây này không mang tính thời sự như cách đây mấy năm. Hi.

[tb_0000]

Hi. Cái đó em có thể tìm hiểu trong một số sách về Cây thuốc mà. Nếu là vì mục đích tìm hiểu để thêm hiểu biết thì em nên học cách tra sách, báo và bài viết sẽ tốt hơn là đi hỏi đó. Học ở trường không quan trọng việc ta nhớ được hết bài trong sách không mà với khối lượng kiến thức lớn trong trường thì ưu tiên đầu tiên là biết cách tra cứu đó em. Cố lên nha.

[phucnguyen860821]

cám ơn các bác. em đang làm bài liểu luận vế cây luc bình nhưng em tìm hoài vẫn không thấy thanh phần hóa học của cây lục bình cả. nhưng dù sao cũng cảm ơn các bác đã chỉ dáo

[power]

Hi moi nguoi,

Minh cung da lam master ve hợp chất thiên nhiên nên ko biết kinh nghiệm này có giúp được cho các bạn không.

Thứ nhất về hợp chất thiên nhiên, khi bạn chọn đề tài thì bạn đã xác định họ hợp chất mà mình cần nghiên cứu. Sau đó chọn cây, hoặc họ cây. Tiếp theo là chọn phương pháp chiết các chất ra khỏi các bọ phần của cây, thượng la ngâm chiêt, chiết soxlet hoặc chiết bằng microwave. Sau đó nếu có nên đi chạy GC-MS hoặc HPLC-MS dịch chiết để xác định các chất trong dịch chiết gồm là gì, chất nào biết rồi, chất nào chưa biết, chất nào cần tách sau đó mới tìm phương pháp tách chất.

Có thể dùng sắc khí cột, dùng HPLC,... tuy nhiên trong diều kiện các bạn làm ở VN nên dùng sắc ký cột vì cái đó các bạn tự làm còn HPLC thi các ban sắc ký cột sơ bộ và gửi đi để nhờ các trung tâm tách.

Đối với sắc ký cột thì mình thấy bạn ancistrocladus đề cập khá kỹ rồi mình cũng xin lưu ý thêm về lượng chất bạn chạy, kích thước cột, lượng chất pha tĩnh cần thiết để tách được các chất vì nếu lượng chất lớn, cột nhỏ thì không thể tách chất ra khỏi nhau đươc (xem bài báo đính kèm). Bên cạnh đó, với HCTN thường tồn tại các dạng đồng phân không gian (có thể R, hoặc S, co thể cis - trans-, alpha,beta,..) những cái đó thì rất khó tách bằng sắc ký cột vì các dạng có thể chuyển đổi qua lại với nhau, nên nhiều trường hợp trong hệ dung môi này thì chỉ có 1 vạch nhưng khi chạy hệ dung môi khác thì nó lại 2 thâm chí 3 đến 4 vạch. Khi đó nên chọn hệ dung môi nào thể hiện 2 vạch rõ ràng và có thể tách bằng HPLC và các bạn chạy HPLC là có thể tách được. (chứ chỉ dựa vào sách ký cột thì thật sự khó để tách được ra chất tinh khiết).

Vấn đề giải phổ thì mình nghĩ là cũng không đến nổi khó lắm đâu. Vì hầu như hợp chât ma các ban tách đã có người nghiên cứu hoặc đề cập trước rồi. Điều cốt yếu là bạn phải có tài liệu tham khảo về nó (ở các bài báo trên các tạp chí). Hồi mình làm để tài thạc sỹ ở VN thấy giải phổ rất khó vì không có tài liệu tham khảo, nhung hiện nay làm PhD ở nước ngoài và có một thư viện tốt thì thấy chỉ cần bạn tách được chất. Đo phổ IR, UV, 13C, 1H,MS giải và so sanh kết quả với các tài liệu là thấy ngay.

Có một kinh nghiệm nữa mình thấy cũng bổ ích với một số bạn là nên đọc tài liệu nhiều trước khi bắt tay vào làm thực nghiệm. Vì nếu bạn không biết mình sẽ làm gì thi khi vào phongd TN các bạn chỉ tốn thời gian thôi. Hay các bạn không biết mình đang tách chất nào thì khi sắc ký cột rất khó mà tách được vì không biết nên chọn hệ dung môi như thế nào.

Mình xin đính kèm hai bài báo khá hay về SKC và phổ NMR nếu các bạn có thắc mắc gì về tài liêu, phổ, sắc ký thì xin cứ trao đổi nhé. (bằng tiếng anh, nhưng mình nghĩ cũng không khó đọc đâu)

Chúc các bạn thành công,
Thân ái,

[xuanthuhathi]

Cho mình hỏi TCM, AcOH là viết tắt của chất gì vậy. mọi người cho mình một số hệ dung môi thật phân cực đc ko,phân cực cỡ Bu:H20:Acid Acetic=411. Cám ơn mọi người

[tigerchem]

mình đoán TCM là tetraclorometan CCl4, AcOH là axit axetic CH3COOH, Ac là viết tắt của nhóm acetyl CH3-C=O, và bạn hỏi hệ thật phân cực để làm gì, chạy cột pha đảo C18, hay để chạy HPLC... thông tin hỏi cụ thể hơn sẽ có giải đáp cụ thể, mình đoán bạn đang tìm hệ phân cực để chạy cột tách chất, bạn có thể nêu thông tin các vết trên bảng chấm TLC của bạn, mọi người sẽ góp ý thêm, thân

[xuanthuhathi]

Mình định tách chất trên TLC thôi vì lượng của mình chỉ có 50mg rồi cạo bản mỏng. Trên bản mỏng, với hệ Bu:H2O:AcOH=5:5:0,8 (lấy lớp trên) thì cho vết gần như hình số 8 (thật ra thì 2 vết chồng lên nhau khá khít),ngoài ra còn có tạp nữa.Mình đã thử thay đổi mọi tỉ lệ nhưng không tách đc 2 vết ra, đã chạy qua Clo:Me:H2O=65:35:7, và Bu:H2O:AcOH=5:4:1 nhưng vẫn ko tách đc. Chất của mình đc lấy ra từ cột pha đảo, có điều lạ là mình chạy hệ dung môi MeOH:H2O=1:15 mà vết vẫn ở trên đỉnh sát đường dung môi khi đốt có màu tím (chứng tỏ nó không phải là đường?) nên mình dùng hệ MeOH:H2O=1:2 (vết vẫn ở trên đỉnh).Nguồn gốc chất của mình là như vậy,bây giờ lượng còn rất ít nên chắc chỉ cạo bản thôi.

[power]

TCM la triclometan (cloroform), minh chua thay ai chay cot bang ccl4 ca.

[beheo]

bạn thử dùng hệ etyl acetat:acid acetic:nước (50:11:13) xem thế nào nha.Hệ này mình dùng cho pha thường.Nếu được kết quả tốt thì báo cho mình biết với nha.

[xuanthuhathi]

Theo mình thì nên cố gắng tách bằng các phương pháp có sẵn trong Lab của các bạn trước khi đem đi thuê chạy trên pHPLC. Thứ nhất là vì thiết bị này chưa thịnh hành ở VN và thứ hai là tốn kém. Một số điểm bạn cần cố gắng làm trước khi bó tay ngồi chờ cứu viện của các thiết bị mà bạn không có sẵn, theo tôi như sau:
-Cố gắng tách các vết ra khỏi nhau trên bản mỏng phân tích, anlytical TLC-0.25 mm , với sự khác nhau của ∆Rf ít nhất là 0.015. Khảo sát với thật nhiều hệ dung môi khác nhau vì có thể hệ này không tách nhưng sang hệ khác nó lại tách, vì để tạo ra một resolution đủ lớn thì các bạn biết rồi là nó phụ thuộc vào tính phân cực (polarity) và tính lựa chọn (selectivity factor) của hệ dung môi (còn yếu tố khác như pha tĩnh là silica gel thì đã bị cố định bởi nhà sản xuất mất rùi). Các giá trị Rf nên nằm từ 0.25 -0.55 vì trong khoảng này có sự ổn định khi chuyển sang tách trên cột silica gel (40-63 µm) với cùng 1 loại dung môi. Nếu chạy sắc ký cột nhanh FCC thì cần ∆Rf ít nhất là 0.1 thì tách mới dẽ không thì sẽ cần chạy trên cột có chiều cao và chạy chậm để tách các ∆Rf khoảng 0.03. Với các alkaloid thì người ta dùng thuốc thử Dragendoff và hay dùng hệ dung môi TCM/MeOH hoặc TCM/M/nước đôi khi cần thêm các bazo vào như là TCM bão hòa NH3 hoặc bazo hưu cơ. Để thay TCM người ta hay dùng DCM cho đỡ đôc. Như tách hiệu quả thì TCM vẫn hữu dụng hơn dù là trên TLC khoẳng cách Rf gần giống nhau, điều này là do hệ dm có TCM với hệ có DCM thể hiện tính lựa chọn khác nhau. Tính lựa chọn thể hiện rõ nhất khi tách các terpenoids đang dùng hệ dung môi H/EtOAc mà chuyển sang chạy DCM/ AC hoặc TCM/MeOH có độ phân cực tương đương (khoảng cách Rf như nhau), ở 1số ít trường hợp vết thấp chuyển vị trí cho vết cao và ngược lại, cứ như trên RP-TLC vậy.<o:p></o:p>
Với các hỗn hợp phân cực như peptides, saponins, glycosides hoặc flavonoid glycoside thì khó tách hơn, người ta vẫn thích dùng TCM/MeOH/nước như 70/30/3; 30/9/1; 65/25/4; 65/35/10; BuOH/AcOH/H2O = 5/1/4; EtOAc/MeOH/H2O = 8/1/1 hoặc EtOAc/MeOH/H2O/toluene = 100/15/14/2 và rất nhiều hệ khác hiệu quả tách cao. Chúng ta chỉ cần khảo sát kỹ thì chọn được hệ dung môi thích hợp dễ tách, dễ cô cất dung môi, rẻ tiền và không độc hại.<o:p></o:p>
Với các hỗn hợp nhỏ hơn 50 mg thì chay cột nhỏ từ các pipet nhỏ hoặc ai biết đổ pTLC thì càng nhanh, đưa chất lên bản mỏng và triển khai sau đó cạo ra và rửa giải trong 1 pipet nhỏ là đủ. Chỉ cần độ tinh khiết 94-95% là chạy NMR ngon lành rùi. Đôi khi hỗn hợp đồng phân 85-90 % cũng phải chịu thôi.<o:p></o:p>
Cuối cùng nễu qua rất nhiều hệ dm mà vẫn không tách được trên TLC thì thôi đành test thử với RP-TLC vậy thôi. Tiếp theo là tách thử trên RP-SPE như Sep-Pak C18 trước khi dựng cột C18 lên. Nếu mà vẫn không tách được trên open ODS (Đôi khi SEPABEADS hạt nhỏ hoặc Diaion HP-20 chạy với dm MeOH/H2O hoặc Sephadex LH20 với hệ dm H/DCM/MeOH = 5/5/2; DCM/MeOH =5/5 hoặc MeOH lại có thể giải quyết được) thì đành mang ra cầu kiu pHPCL.

Hệ EtOAc:MeOH:H2O=8:1:1 không đồng tan, mình đã thử EtOAc:MeOH:H2O=6:1:1 mà cũng ko đồng tan (mà có phải EtOAc là viết tắt Ethyl Acetat ko, hic)

[katetrang]

chính xác EtOAc la ethyl acetat, hệ ko đồng tan bạn có thể lấy lớp trên hoặc lớp dưới thử xem

[tie.pok]

Đúng, EtOAc là Ethyl acetat. Nhưng không có chuyện hệ EtOAc:MeOH:H2O = 8 : 1 : 1 không thể hòa tan đồng thể với nhau (chỉ là hơi khó chút xíu thôi à). Bạn nên lắc thật kỹ hệ dm sau khi pha, nếu không được hãy kiểm tra lại độ tinh khiết của dm (có thể trong EtAc và nhất là MeOH trước đó đã lẫn nước). Bạn cũng có thể tăng tỷ lệ của MeOH lên 1.5 hoặc 2, 2.5,... để tìm hệ tách phù hợp với chất của bạn.

[power]

hi,

he EtOAc:MeOH:H20 = 8:1:1 chac chan dong tan. Minh da chay cot voi he do. Tuy nhien khi chay cot ban phai chung cat de thu EtoAc tinh khiet, MeOH phai lam khan voi Mg turnings and I2. H2O phai lay nuoc cat 2 lan, hoac nuoc cat de chay HPLC la tot nhat. Khong nen tang MeOh len qua 20% vi nong do MeOH cao se hoa tan silica gel.

Truong hop neu silicagel bi hoa tan, ban nen tim 1 dung moi nao do ko hoa tan silicagel nhung hoa tan chat cua ban de tach.

Chuc thanh cong,

[xuanthuhathi]

Bạn Power ơi,MeOH ko thể chiếm quá 20% đc à, mình thấy 1 hệ rất đc mọi người yêu thích là ChCl3: MeOH: H2O=65:35:7, ko biết dùng hệ này có đc ko?
Nhân đây, mình cũng có vài câu hỏi xin hỏi ý kiến mọi người vì mình mới bước chân vào nghiên cứu nên cũng ...hơi ngu:
Thứ nhất, vết trên bản mỏng có Rf=2-3 thì khi đưa lên cột sẽ tách tốt?thế nhưng chỗ mình vẫn hay chọn hệ dung môi cho vết khá thấp, thường chỉ khoảng 0,5 thôi.
Thứ 2, tốc độ dung môi cho chạy qua cột có liên quan gì đến Rf của vết cần tách hay ko và nếu dung môi khi chạy qua bản mỏng kéo rất lâu thì khi đưa lên cột có cho dung môi chạy chậm ko?
Thứ 3, vì sao khi chọn đưa dung môi lên cột thì hay cố tìm hệ dung môi nào cho vết tròn, vì mình thấy nhiều hệ dung môi cho vết hình chữ nhật dù chất khá sạch?
Thứ 4, câu hỏi này hơi ngu mong mọi người đừng cười, có phải chất nào trên cột mà ra càng sau thì càng sạch, chắc chắn?
Thứ 5, mình rất thích dùng hệ có acid Formic, và hay đưa lên cột với tỉ lệ dưới 5%, ai có kinh nghiệm về hệ này có gì cần lưu ý mong mọi người chỉ giúp
Thứ 6, mình đưa hệ dung môi lên cột có diclorometan lên cột thì bị hỏng, không biết có phải do nhiệt độ bay hơi của DCM quá thấp? có ai từng đưa diclorometan lên cột chưa?
Và cuối cùng mình xin chia xẻ với các bạn về phương pháp chiết pha rắn. Phương pháp này có thể thay thế các phân đoạn chiết trong bình gạn, hoặc sau khi mình chiết xong các phân đoạn trong bình gạn rồi thì vẫn có thể đem các phân đoạn đó chiết pha rắn với các dung môi có độ phân cực tăng dần, mình thấy phương pháp rất hay giúp tìm hệ dung môi dễ hơn nhiều, ko biết mọi người làm phương pháp này nhiều chưa. Cám ơn mọi người đã 'chụi khó' đọc bài mình, và thank ...nhiều nhiều nếu có hồi âm cho mình!

[power]

Hi,

Thong thuong thi neu luong methanol qua 20% se hoa tan SiO2. Tuy nhien SiO2 lai ko xuat hien pic tren pho NMR va lai ko tan trong mot so dung moi chay NMR thong thuong nen mot so truong hop van co the chay cot voi MeOH tren 20% (tuy nhien ban ko the phan tich hoa hoc, hay nghien cuu cac tinh chat khac cua chat duoc tach,... nen ko nen dung qua 20%).

cau thu nhat: tuy thuoc vao chat can tách, tuy nhien nen lay dun moi xuat phat Rf cho chat can tach khoang 0,1-0,2 la tot.

Cau thu 2: Có. Tuy thuoc vao khoảng cach Rf cua các chất, va kích thước cột. Neu chạy các chất co Rf quá gần nhau thi nên chạy cột cao, va chạy thật chậm và ngược lại. Con toc do chay, kich thuoc cot, luong chat... nhu the nao thi ban xem bai bao minh dinh kem o tren.

Câu 3. Thường thì chọn dung moi cho vet tròn, Khi ban chấm vào bản mỏng bao giờ cũng hình tròn. nếu la 1 chât trong 1 hệ dung môi, cùng điều kiện thì tốc độ di chuyển phải bằng nhau nên vet thu được phải la vet tron. Tuy nhiên trong mot so trương hop, do bản mõng, do de ban mong vao binh chay cot ko can bang,... thi vet co the bi bien dang. Nhung chat sach neu dieu kien chay ban mong on dinh thi vet phai tron. Con vet ko tron thi ko sach.

Câu 4. Sạch hay ko ko phai ra truoc hay sau. Tuy theo Rf cua no ma no ra truoc hay sau trong he dm ma ban tach thoi.

Cau 5: minh chay cot voi AcOH 1% thay cung on. Nhung chung cat de thu AcOH tinh khiet cung oai lam nen it dung. Minh nghi cung giong HCOOH thoi.

Cau 6. Minh thuong xuyen chay DCM:MeOH (1-15%), chay rat tot, dac biet la tach cac hctn. Nhung ban nho chung cat DCM va MeOH de dam bao dry truoc khi chay. Ben nay minh chung cat va thu DCM trong khi Ar, dry MeOH bang Mg and I2.

A quyen, mua nay ben VN nhiet do ngoai kha cao nen chay cot voi DCM cung hoi kho. ban nen chay vao luc sang som de thoi tiet mat hon. (minh nghi vay)

Than ai

[xuanthuhathi]

Vì sao có trường hợp trên bản mỏng cùng hệ dung môi nhưng tùy tỉ lệ khác nhau lúc thì cho 2 vết tròn, lúc lại cho 1 vết tròn 1 vết hình chữ nhật, khi nào cũng chỉ có 2 vết.

[xuanthuhathi]

Vì sao có trường hợp trên bản mỏng cùng hệ dung môi nhưng tùy tỉ lệ khác nhau lúc thì cho 2 vết tròn, lúc lại cho 1 vết tròn 1 vết hình chữ nhật, khi nào cũng chỉ có 2 vết.

Sorry mọi người, mình ghi sai, cùng hệ dung môi nhưng tùy tỉ lệ khi thì cho 2 vết tròn khi thì cho 2 vết hình chữ nhật, như vậy nếu tính tương ứng thì vết tròn là 1 chất thì vết chữ nhật cũng là 1 chất?mà mình chạy lui chạy tới nhiều lần vẫn bị vậy à,như vậy làm thế nào để có sự ổn định
Bạn Power ơi, DCM:MeOH (1-15%) nghĩa là tỉ lệ MeOH từ 1-15% hả bạn. Bài báo bạn gởi kèm sao ko thấy đường link

[power]

Hi,

Dung roi 1-15% MeOH tuy theo chat minh can tach. cai do thu TLC truoc roi tach.

Bai bao o bai viet dau tien cua minh trong topic nay. ban xem o tren a.

Than ai

[xuanthuhathi]

Mình đúng là "chưa đi chưa thấy núi Thái Sơn". Mình cứ nghĩ là vết nào tròn thì là một chất mới chết chứ. Không ngờ khi chạy qua chạy lại nhiều cái cột thì nó bung ra không biết bao nhiêu vết. Cảm ơn mọi người, đặc biệt là bạn power nhé!

[power]

Hi,
Ko co gi dau. Nhung minh nghi ngo sao ban chay di chay lai ra nhieu chat vay? Can than keo dung moi, hoac dung cu ko sach lam hu mau cua ban.

Co gi can trao doi thi nhan lai nhe

chuc thanh cong

[xuanthuhathi]

Các bạn ơi, cho mình hỏi có khi nào có hiện tượng với hệ dung môi 1, Rf vết A cao hơn vết B mà trong hệ dm 2 Rf vết B cao hơn vết A ko?

[power]

hi,

Cai do minh nghi la co. Tuy theo he dung moi thoi. Nhung rat hiem. Minh cung da gap 1 lan roi, nhung ko nho ro la he nao ca. Lan do minh chay lan 1 voi he dung moi 1 (lay chat ra truoc) thay tach duoc chat nhung ko sach, chay NMR xac dinh duoc chat, sau do chay lai voi he dung moi 2 va lay chat ra truoc minh dinh ninh la chat can tim va no kha sach tuy nhien sau do minh chay NMR lai la chat thu 2 cua lan 1.

Cai nay minh thay xay ra khi cac chat co Rf kha gan ngau nhau. Nhung rat hiem, nhung can than van hon

[xuanthuhathi]

Các bạn ơi,cho mình hỏi với!
Mình chạy cột với tỉ lệ là TCM:Ethyl acetat: MeOH (20:1:1) thì thấy tách ra nhiều vòng khá tốt. Lúc mình kiểm tra trên bản mỏng, các vết khá gần nhau nên đã xác định là sẽ cho chạy chậm rồi, thế nhưng đang vội thế là mình cho chạy nhanh khoảng 150ml dung môi chạy cột ban đầu; kết quả là ở chính giữa của mối vòng nó bị kéo xuống (như là chúng ta bỏ cục đá vào giữa cái võng thì nó bị đè xuống vậy). Mính đã cho dung môi chạy chậm lại (4 giọt/1 phút),mỗi ngày hứng có đc 100ml à thế là các vòng đỡ "xệ" hơn 1 chút nhưng vẫn còn khá "xệ". Mình cho chạy như vậy là 2 ngày rồi, nhưng mà cho chạy chậm như thế này thì mình chết mất, thứ nhất là chắc 1 tháng mới chạy xong cột, mà mình thì gấp quá, thứ nữa là TCM tỉ trong hơi lớn, mình sợ nó cứ chui xuống dưới làm thay đổi độ phân cực của dung môi ở trên cột. Có ai qua t hợp này chưa, mấy bạn cho mình ý kiến với. Thank mấy bạn nhiều nghe!

[power]

Hi,

Cai do ko phai chay cham hay chay nhanh. neu ban chay nhanh thi cac chat no chong len nhau nen ban ko tach duoc thoi. Truong hop cua ban la do nhoi cot ko chat. Khi ban nhoi cot da de co bong bong o trong cot, hoac la ban bo chua du Bong va Cat de cot du do chat nen co the silicagel bi chay ra theo dung moi nen khi ban chay phan silicagel o giua bi chay ra nhieu hon lam cho vet cchat bi vong xuong. Khi ban chay cham luong silicagel ra it nen vong it, khi chay nhanh no ra nhieu nen do chenh lech nhieu no vong nhieu.

Ko ai chay cot 4 giot 1 phut ca, chay nhu vay cung chang duoc gi ma lai mat thoi gian. Hon nua DCM rat de bay hoi nen neu chay nhu vay se lam ti le dung dich chay cot ko on dinh. Minh nghi ban se kho ma tach duoc chat sach.

[thanhchemis]

Bạn Power nói đúng đấy, cái này ko phải nhanh hay chậm đâu mà là do quá trình nhồi cột ko đều thôi. Về ngtắc thì quá trình qiải hấp sẽ bị anhe hưởng. Mình cũng khô biết bạn có người hướng dẫn làm thực nghiệm ko chứ mình chưa thấy ai cho cột chạy 4 giọt/phút bao giờ cả?

[xuanthuhathi]

Cám ơn các bạn. Thực ra thì mình cho chạy tốc độ 4 giọt/phút là tính vào ban đêm (từ 7h tối đến 8h sáng hôm sau) chứ ban ngày mình cho chạy lẹ hơn (hì,chứ nhìn cột vậy tay chân mình chụi gì nổi) nhưng mình viết vậy cho đỡ diễn đạt (cốt ý để các bạn thấy tình hình 'cấp cứu' mà hồi âm sớm,hihi). Chỗ mình ko dùng cát, chỉ dùng bông gòn thôi nhưng mình ko nghĩ là bông mình chưa đủ chặt (mình chỉ sợ là cho bông vào quá nhiều làm giảm dòng chảy). Sau khi gởi bài ko thấy ai hồi âm là mình đã cho chảy nhanh hơn rất nhiều (tối vẫn cho chảy chậm), nhưng vòng mới xuất hiện đâu có bị "xệ" (mình cho dm chạy gần như tối đa); vả lại tỉ lệ dm mình chạy đâu hòa tan đc silicagel,nếu nó bị chảy ra sẽ bám ở thành ống nghiệm chứ?Power à,không biết mình sai ở chỗ nào nhỉ,bong bóng thì bên ngoài cột bảo đảm ko có cái nào?