pinky136
05-17-2009, 07:52 PM
2. Nguyên tắc:
Pha loãng mẫu thử bằng nước. Lọc qua màng lọc xém mép 25000D để loại bỏ chất không tan và có liên kết phân tử cao. Các ion iodua được tách bằng cặp ion pha đảo HPLC có detector điện hóa và một điện cực bằng bạc làm việc ở 0mV đến 50mV. Hàm lượng iodua được tính bằng cách dùng đường chuẩn
3. Thuốc thử:
Chỉ sử dụng thuốc thử đạt chất lượng tinh khiết phân tích hoặc loại HPLC đặc biệt nếu phù hợp.
3.1 Nước phù hợp với loại nước 2 cửa TCNV 4851-89 (ISO 03696)
3.2 Dung dịch tiêu chuẩn Iodua
Cảnh báo: Các dung dịch Iodua không bền khi tiếp xúc với ánh sáng vì thế cần được bảo vệ tránh ánh sáng.
3.2.1 Dung dịch gốc Iodua tương đương với 100mg iodua trên lit/
Hòa tan 130,8g KI trong nước đựng trong bình định mức 1000ml (6.2). Pha loãng bằng nước đến vạch và lắc đều.
Dung dịch Iodua có thể giữ trong vòng 1tháng nếu được bảo quản trong bóng tối ở nhiệt độ phòng.
3.2.2 Dung dịch tiêu chuẩn làm việc iodua có nồng độ tương đương 20 μg ;50 μg ;150 μg và 250 μg , dung dịch gốc iodua (5.2.1) cho vào trong 4 bình định mức 100ml riêng biệt (6.2). Pha loãng dung dịch trong các bình bằng nước đến vạch và lắc.
Các dung dịch tiêu chuẩn làm việc iodua có thể giữ được trong vòng 1tuần nếu bảo quản trong bóng tồi ỡ nhiệt độ phòng.
3.3 Axetonitril (CH3CN) loại dùng cho HPLC
3.4 Hexandexyltrimetylamoni clorua [CH3(CH2)15N(CH3)3Cl] dung dịch 25% (theo khối lượng) trong nước, loại dùng cho sắc ký tan.
3.5 Chất rửa giải dùng cho HPLC: hỗn hợp dinatrihydrophotphat và hexandexyltrimetylamoni clorua trong hỗn hợp các axetonitril và nước ( tỷ lệ 68:32 thể tích ) pH 6,8 trong khoảng 600ml nước trong bình định mức 1000ml (6.2)
Thêm 1,3ml dung dịch hexandexyltrimetylamoni clorua và chỉnh pH đến 6,8 bằng axit photphoric (H3PO4) đậm đặc pha loãng bằng nước đến vạch và lắc đều.
Làm trong dung dịch bằng cách lọc qua màng lọc 1,2 μg rồi lọc tiếp qua màng lọc 0,5 μg. Khuấy dung dịch để trộn đều đầy loại khí bằng thiết bị hút chân không siêu âm trong 2phút trước khi bắt đầu sử dụng. Chất rửa giải có thể thay đổi bằng cách thêm nước hoặc axetonitril để việc chỉnh thời gian lưu của iodua là không đáng kể. Chất rửa giải có thể giữ được trong 1 năm nếu được bảo quản trong vật chứa có nắp đậy kín.
7.2 Xác định bằng HPLC
7.2.1 Tối ưu hóa các điều kiện HPLC
Rửa cột HPLC mới bằng cách bơm qua cột một hỗn hợp axetonitril và nước (tỷ lể 1:1 thể tích) và bơm tiếp 30ml chất rửa giải HPLC. Rồi bơm lại chất rửa giải với tốc độ 2ml/min trong vòng ít nhất 1 giờ.
Bật detector điện hóa ( điện thế 0mV đến + 50mV ; đầu ra với thang đo từ 10nA đến 20nA ). Tiếp tục bơm chất rửa giải HPLC cho đến khi thu được đường nền ổn định.
Bơm tiếp 50…dung dịch tiêu chuẩn làm việc iodua với nồng độ iodua 250… cho đến khi thời gian lưu và chiều cao pic là ổn định; tức là chênh lệch tuyệt đối giữa các chiều cao pic của hai lần bơm kế tiếp nhau không vượt quá 3%. Thời gian lưu các iodua nằm trong khoảng từ 4phút đến 8 phút; nếu khồng ta chỉnh lại thành phần của chất rửa giải. Chỉnh điện thế của điện cực trong khoảng 0mV đến +50mV để tối ưu hóa dạng của pic và chiều cao của pic.
Xác định thể tích bơm của dung dịch tiêu chuẩn làm việc iodua 250… cho chiều cao pic khoảng 80% kích thước thực. Sử dụng thể tích bơm này cho tất cả các dung dịch thử và các dung dịch tiêu chuẩn.
Dịch rửa giải HPLC có thể được bơm lại giữa các lần phân tích mẫu hoặc khi chỉ có các dung dịch tiêu chuẩn được bơm. Tuy nhien, không bơm dịch rửa giải khi đang bơm các dung dịch thử. Khi sử dụng thông thường, dịch rửa giải được bơm ở tốc độ 0,2 ml/min để duy trì tính sẵn sàng của hệ thống. Trong suốt quá trình sử dụng giữa các khoảng thời gian bị kéo dài , hệ thống HPLC được rửa bằng hỗn hợp axetonitril và nước ( tỷ lệ 1:1 thể tích) và cân bằng lại bằng dịch rửa giải HPLC trước khi dùng tiếp.
Co ai do giup dum minh voi,minh doc ma ko hieu gi het.Cac ban cho minh bit vai tro cua cac thuoc thu,pha dong o day la gi,pha tinh la gi.va pp nay la sac ky gin ha.noi chung la cac ban bit gi ve quy trinh nay thi cu cmt giup minh.thank
Pha loãng mẫu thử bằng nước. Lọc qua màng lọc xém mép 25000D để loại bỏ chất không tan và có liên kết phân tử cao. Các ion iodua được tách bằng cặp ion pha đảo HPLC có detector điện hóa và một điện cực bằng bạc làm việc ở 0mV đến 50mV. Hàm lượng iodua được tính bằng cách dùng đường chuẩn
3. Thuốc thử:
Chỉ sử dụng thuốc thử đạt chất lượng tinh khiết phân tích hoặc loại HPLC đặc biệt nếu phù hợp.
3.1 Nước phù hợp với loại nước 2 cửa TCNV 4851-89 (ISO 03696)
3.2 Dung dịch tiêu chuẩn Iodua
Cảnh báo: Các dung dịch Iodua không bền khi tiếp xúc với ánh sáng vì thế cần được bảo vệ tránh ánh sáng.
3.2.1 Dung dịch gốc Iodua tương đương với 100mg iodua trên lit/
Hòa tan 130,8g KI trong nước đựng trong bình định mức 1000ml (6.2). Pha loãng bằng nước đến vạch và lắc đều.
Dung dịch Iodua có thể giữ trong vòng 1tháng nếu được bảo quản trong bóng tối ở nhiệt độ phòng.
3.2.2 Dung dịch tiêu chuẩn làm việc iodua có nồng độ tương đương 20 μg ;50 μg ;150 μg và 250 μg , dung dịch gốc iodua (5.2.1) cho vào trong 4 bình định mức 100ml riêng biệt (6.2). Pha loãng dung dịch trong các bình bằng nước đến vạch và lắc.
Các dung dịch tiêu chuẩn làm việc iodua có thể giữ được trong vòng 1tuần nếu bảo quản trong bóng tồi ỡ nhiệt độ phòng.
3.3 Axetonitril (CH3CN) loại dùng cho HPLC
3.4 Hexandexyltrimetylamoni clorua [CH3(CH2)15N(CH3)3Cl] dung dịch 25% (theo khối lượng) trong nước, loại dùng cho sắc ký tan.
3.5 Chất rửa giải dùng cho HPLC: hỗn hợp dinatrihydrophotphat và hexandexyltrimetylamoni clorua trong hỗn hợp các axetonitril và nước ( tỷ lệ 68:32 thể tích ) pH 6,8 trong khoảng 600ml nước trong bình định mức 1000ml (6.2)
Thêm 1,3ml dung dịch hexandexyltrimetylamoni clorua và chỉnh pH đến 6,8 bằng axit photphoric (H3PO4) đậm đặc pha loãng bằng nước đến vạch và lắc đều.
Làm trong dung dịch bằng cách lọc qua màng lọc 1,2 μg rồi lọc tiếp qua màng lọc 0,5 μg. Khuấy dung dịch để trộn đều đầy loại khí bằng thiết bị hút chân không siêu âm trong 2phút trước khi bắt đầu sử dụng. Chất rửa giải có thể thay đổi bằng cách thêm nước hoặc axetonitril để việc chỉnh thời gian lưu của iodua là không đáng kể. Chất rửa giải có thể giữ được trong 1 năm nếu được bảo quản trong vật chứa có nắp đậy kín.
7.2 Xác định bằng HPLC
7.2.1 Tối ưu hóa các điều kiện HPLC
Rửa cột HPLC mới bằng cách bơm qua cột một hỗn hợp axetonitril và nước (tỷ lể 1:1 thể tích) và bơm tiếp 30ml chất rửa giải HPLC. Rồi bơm lại chất rửa giải với tốc độ 2ml/min trong vòng ít nhất 1 giờ.
Bật detector điện hóa ( điện thế 0mV đến + 50mV ; đầu ra với thang đo từ 10nA đến 20nA ). Tiếp tục bơm chất rửa giải HPLC cho đến khi thu được đường nền ổn định.
Bơm tiếp 50…dung dịch tiêu chuẩn làm việc iodua với nồng độ iodua 250… cho đến khi thời gian lưu và chiều cao pic là ổn định; tức là chênh lệch tuyệt đối giữa các chiều cao pic của hai lần bơm kế tiếp nhau không vượt quá 3%. Thời gian lưu các iodua nằm trong khoảng từ 4phút đến 8 phút; nếu khồng ta chỉnh lại thành phần của chất rửa giải. Chỉnh điện thế của điện cực trong khoảng 0mV đến +50mV để tối ưu hóa dạng của pic và chiều cao của pic.
Xác định thể tích bơm của dung dịch tiêu chuẩn làm việc iodua 250… cho chiều cao pic khoảng 80% kích thước thực. Sử dụng thể tích bơm này cho tất cả các dung dịch thử và các dung dịch tiêu chuẩn.
Dịch rửa giải HPLC có thể được bơm lại giữa các lần phân tích mẫu hoặc khi chỉ có các dung dịch tiêu chuẩn được bơm. Tuy nhien, không bơm dịch rửa giải khi đang bơm các dung dịch thử. Khi sử dụng thông thường, dịch rửa giải được bơm ở tốc độ 0,2 ml/min để duy trì tính sẵn sàng của hệ thống. Trong suốt quá trình sử dụng giữa các khoảng thời gian bị kéo dài , hệ thống HPLC được rửa bằng hỗn hợp axetonitril và nước ( tỷ lệ 1:1 thể tích) và cân bằng lại bằng dịch rửa giải HPLC trước khi dùng tiếp.
Co ai do giup dum minh voi,minh doc ma ko hieu gi het.Cac ban cho minh bit vai tro cua cac thuoc thu,pha dong o day la gi,pha tinh la gi.va pp nay la sac ky gin ha.noi chung la cac ban bit gi ve quy trinh nay thi cu cmt giup minh.thank