Anh em cho hỏi về máy so màu quang phổ Varian Cary 50 Conc, Bio-Rad 18cell

[tie.pok]

Chào bạn,

Nguyên văn bởi viva.dawnsun

@ giotnuoctrongbienca: tôi cũng từng nghỉ là cuvet có vấn đề nên đã thử dùng nước cất set zero sau đó trút nước cất ra hết và dùng lại chính cuvet đó chứa blank đo thì kết quả vẫn là âm, mắt thường thấy ngay nước cất thì trong suốt còn mẫu thì vàng thế mà lại âm mới lạ

Như thế này thì càng phải test máy bạn à.

Nguyên văn bởi viva.dawnsun

@ tie.pok: rất tiếc tôi không có điều kiện test bằng những dung dịch như bạn chỉ vì thời gian phân tích mẫu vô cùng gấp rút, tranh thủ từng phút một.

Tôi đọc trong AOAC 991_10 thấy có mục "D. Spectrophotometer Evaluation" nên thiết nghĩ việc phân tích của bạn gấp đến đâu thì cũng nên làm, ít nhất là sau khi bật máy lần đầu trong ngày.

Nguyên văn bởi viva.dawnsun

là không làm được với quy trình đo ChE vì mẫu blank gồm cơ chất + DTNB + sodium phosphate còn mẫu thì gồm cơ chất + DTNB + dịch nghiền, tức mẫu thì thay sodium phosphate bằng dịch nghiền!

Quy trình gì mà lạ thế nhỉ, phân tích mà mẫu và blank không cùng hệ quy chiếu thì tính toán kết quả ra sao? Quy trình này có vấn đề rùi??? Hay là trong "dịch nghiền" của bạn đã có trộn sẵn dung dịch đệm phốt phát, nếu có đúng là trộn sẵn thì sai số lớn chắc chắn sẽ xảy ra.

Nguyên văn bởi viva.dawnsun

không còn set zero bằng nước cất hay sodium phosphate nữa mà là set zero bằng chính mẫu blank luôn. Liệu có ổn không???

Quá là ổn đi, hii... Đó chính là điều tôi muốn gửi tới bạn từ bài trước.

[viva.dawnsun]

Quy trình gì mà lạ thế nhỉ, phân tích mà mẫu và blank không cùng hệ quy chiếu thì tính toán kết quả ra sao? Quy trình này có vấn đề rùi??? Hay là trong "dịch nghiền" của bạn đã có trộn sẵn dung dịch đệm phốt phát, nếu có đúng là trộn sẵn thì sai số lớn chắc chắn sẽ xảy ra.

Dịch nghiền không trộn sodium phosphate mà dịch nghiền chỉ có 1,5 ml KH2PO4/K2HPO4 pH 7,5 + não. Quy trình này đúng như Ellman (1961) hướng dẫn đấy chứ !!??

Trích:
Nguyên văn bởi viva.dawnsun View Post
không còn set zero bằng nước cất hay sodium phosphate nữa mà là set zero bằng chính mẫu blank luôn. Liệu có ổn không???
Quá là ổn đi, hii... Đó chính là điều tôi muốn gửi tới bạn từ bài trước.

Điều này mình có thảo luận ở post # 7

Như em đã nêu có cái trục trặc lớn là chuyện dùng mẫu set zero, có khi cán bộ hướng dẫn dùng là nước cất, khi lại là buffer, thấy chạy đi chạy lại nhiều lần vất vả quá hôm nay cán bộ lại lấy mẫu blank (900µl DTNB + 50µl buffer + 50µl cơ chất) để set zero luôn. Em thấy hơi đắn đo 1 số vấn đề: Em nghỉ set zero là để máy lấy cái mốc từ đó mình đo blank và đo mẫu. Lấy Abs mẫu trừ cho Abs blank sẽ ra 1 Abs chênh lệch là Abs do chính ChE trong mẫu phản ứng tạo màu sậm hơn gây. Nhưng không hiểu là tại sao rất nhiều lần set zero là nước cất hay buffer thì lại ra giá trị âm - tại sao blank màu vàng thế kia lại cho ánh sáng xuyên qua nhiều hơn hơn cả nước cất được !!??
Con dùng mẫu blank để set zero theo suy nghĩ của em nó sẽ ra kết quả không chính xác vì set zero chỉ lấy 1 giá trị tức thời trong 1 lần chiếu sáng làm mốc, mà theo em thấy thì mẫu blank có phải ứng tạo màu thay đổi dần dần chứ không phải là 1 màu cố định (em theo dõi biểu đồ hôm trước đo mẫu blank thấy Abs thay đổi liên tục trong thời gian 3 phút đo), đo trong 3 phút là để nó lấy các giá trị Abs của nhiều lần chiếu sáng đưa vào công thức những thay đổi màu đó rồi đưa ra 1 giá trị Abs/min cuối cùng (em đang search công thức đó nhưng chưa ra). Do đó việc lấy mẫu blank làm zero sao chính xác được.

Mình lo là các dung dịch trong mẫu blank có phản ứng thay đổi màu làm mình set zero ko đúng!??

[Teppi]

Nguyên văn bởi viva.dawnsun

Cám ơn phần trả lời của các anh rất nhiều!

@tigerchem: điều kiện đo là rất lý tưởng, cuvet em rửa rất kỹ + không trầy, điện rất ổn định vì lab của em dùng điện từ trạm biến áp riêng của trường. Em nghĩ cần set zero trước chứ, việc zet zero cũng cho mình bít tình trạng máy có đạt chưa trước khi bắt đầu tiến hành đo mẫu. Nếu dung dịch blank kết quả âm so với zero là điều bất thường vì hóa chất lại trong hơn cả dung dịch zero là sai. Điều đắn đo lnhiều à dung dịch set zero và dung dịch chạy blank chính xác là gì?

Hi,

Có các nguyên nhân không thuộc phạm vi thực hành chuyên môn cũng khiến gây ra sự không ổn định và chạy giá trị đọc khi lấy chuẩn zero:

1- Rung động nguồn phát hoặc đầu dò, cũng tương tự tình trạng lệch nguồn phát hay đầu dò ở một mức độ nhỏ. Khi đó giá trị đọc cứ chạy lên chạy xuống liên tục. Mạch điện tử phải liên tục chạy hiệu chỉnh tín hiệu, đèn tín hiệu nhấp nháy liên tục.

2- Thực hiện lấy giá trị ngay khi máy vừa mở, nguồn vừa phát ra. Một số thiết bị cũ vẫn còn dùng một số đèn đốt tim. Thông thường, nếu máy chưa khởi động đủ nóng thì nguồn phát sẽ không đủ để đầu dò nhận được. Tuy nhiên, có trường hợp, mới bật máy lên, cường độ dòng và áp tăng đột ngột. Máy cũ lại thiếu thiết bị chống lấy tin hiệu nhiễu do quá dòng hay quá áp...thế là nó ghi nhận...Sau đó mạch bù sẽ làm việc với nhiễu này gây ra sự chênh lệch lớn. Sau đó , dòng-áp trở lại trạng thái bình thường thì nguồn phát không đủ gây sụt giảm ..mạch bù lại chạy tiếp...kết quả giá trị đọc giảm đi dần theo ...gây cảm tưởng sai lệch cho người thao tác.

3- Nhiễu áp do một vài linh kiện bên trong bị hỏng. Một số tụ cũ, điện trở chập chờn bên trong bị hỏng cũng gây nhiễu áp theo dạng xung. Nguồn phát sẽ không cấp phát đủ áp- dòng cho đèn do các linh kiện hỏng này ngốn lúc nhiều lúc ít, cho dù điện áp nguồn cấp là ổn định.

Thế câu hỏi của tôi đặt ra cho bạn với cán bộ hướng dẫn là :
- máy này đã được đưa đi kiểm định và hiệu chuẩn chưa? Ở đâu? lần gần đây nhất là lúc nào?
- Vị trí máy đặt có gấn cái máy hút chân không, máy khuấy, máy ly tâm hay máy bơm nào không?
- Phòng có bị rung động do những hoạt động xây dựng hay tương tự nào không?

Thân,

Teppi

[viva.dawnsun]

Thế câu hỏi của tôi đặt ra cho bạn với cán bộ hướng dẫn là :
- máy này đã được đưa đi kiểm định và hiệu chuẩn chưa? Ở đâu? lần gần đây nhất là lúc nào?
- Vị trí máy đặt có gấn cái máy hút chân không, máy khuấy, máy ly tâm hay máy bơm nào không?
- Phòng có bị rung động do những hoạt động xây dựng hay tương tự nào không?

Cám ơn anh, xin trả lời là
- Máy hoàn toàn chưa được hiệu chuẩn!
- Vị trí máy thì chỉ có cách máy đo ion khoảng 1m (máy này có tích hợp máy bơm loại nhỏ) nhưng máy này rất ít khi hoạt động cùng lúc với máy so màu của em
- Phòng hoàn toàn không bị rung động.
(nhiệt độ phòng 17)

[ngvtuan]

Nguyên văn bởi viva.dawnsun

Cám ơn anh, xin trả lời là
- Máy hoàn toàn chưa được hiệu chuẩn!
- Vị trí máy thì chỉ có cách máy đo ion khoảng 1m (máy này có tích hợp máy bơm loại nhỏ) nhưng máy này rất ít khi hoạt động cùng lúc với máy so màu của em
- Phòng hoàn toàn không bị rung động.

(nhiệt độ phòng -17)

bạn và cán bộ hướng dẫn thực hiện chuyển giao quy trình trên máy chưa hiệu chuẩn mình thấy không ổn lắm bất kể việc chuyển giao có thành công hay không đều chưa đạt chuẩn.

Nguyên văn bởi viva.dawnsun

Như em đã nêu có cái trục trặc lớn là chuyện dùng mẫu set zero, có khi cán bộ hướng dẫn dùng là nước cất, khi lại là buffer, thấy chạy đi chạy lại nhiều lần vất vả quá hôm nay cán bộ lại lấy mẫu blank (900µl DTNB + 50µl buffer + 50µl cơ chất) để set zero luôn. Em thấy hơi đắn đo 1 số vấn đề: Em nghỉ set zero là để máy lấy cái mốc từ đó mình đo blank và đo mẫu. Lấy Abs mẫu trừ cho Abs blank sẽ ra 1 Abs chênh lệch là Abs do chính ChE trong mẫu phản ứng tạo màu sậm hơn gây. Nhưng không hiểu là tại sao rất nhiều lần set zero là nước cất hay buffer thì lại ra giá trị âm - tại sao blank màu vàng thế kia lại cho ánh sáng xuyên qua nhiều hơn hơn cả nước cất được !!??

cán bộ hướng dẫn có khi dùng nước cất để zero có khi dùng đệm: như vậy cán bộ hướng dẫn chưa nắm vững quy trình này và chính cán bộ này cũng chưa thực hiện quy trình này bao giờ ?. bạn cần đổi cán bộ hướng dẫn khác.

Nguyên văn bởi viva.dawnsun

Con dùng mẫu blank để set zero theo suy nghĩ của em nó sẽ ra kết quả không chính xác vì set zero chỉ lấy 1 giá trị tức thời trong 1 lần chiếu sáng làm mốc, mà theo em thấy thì mẫu blank có phải ứng tạo màu thay đổi dần dần chứ không phải là 1 màu cố định (em theo dõi biểu đồ hôm trước đo mẫu blank thấy Abs thay đổi liên tục trong thời gian 3 phút đo), đo trong 3 phút là để nó lấy các giá trị Abs của nhiều lần chiếu sáng đưa vào công thức những thay đổi màu đó rồi đưa ra 1 giá trị Abs/min cuối cùng (em đang search công thức đó nhưng chưa ra). Do đó việc lấy mẫu blank làm zero sao chính xác được.

theo mình bạn đang trục trặc ở vấn đề mẫu Blank, trong mẫu mà bạn cho là blank (900µl DTNB + 50µl buffer + 50µl cơ chất) có phản ứng tạo màu thay đổi dần dần thì không thể gọi là Blank được, trong mẫu blank không bao giờ có phản ứng xảy ra. như vậy bạn cần xem xét lại có hay không phản ứng xảy ra giữa DNTB vs Buffer vs cơ chất.

về các phương pháp xác định Cholinesterase bằng máy quang phổ UV-Vis đầu tiên là phương pháp Ellman (1961) trong PP này không chỉ rõ đâu là Blank để đem zero. còn phương pháp AOAC Offocial thì lại nói rõ Blank là gì (Dissolve 0.0396 g DTNB in ca 9 mL pH 7.0 phosphate buffer, add ca 15 mg NaHCO3, and dilute to 10 mL with same buffer. Keep frozen when not in use) ở mẫu Blank theo AOAC thì không có dung dịch cơ chất. như vậy theo mình mẫu Blank của bạn thử bỏ dung dịch cơ chất trong mẫu Blank của bạn !.
hoặc tại sao bạn lại không thử làm theo phương pháp mới AOAC ?. phương pháp Ellman (1961) quá cũ và cổ điển đã có hơn 50 năm rồi mà.